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真菌菌丝经过液氮研磨后加入裂解液（Buffer Rlysis-F），迅速裂解细胞。再通过氯仿抽提、无水乙醇沉淀等步骤，可获得高浓度的RNA。使用本试剂盒，从30mg真菌中提取3～5μg总RNA，获得的RNA OD260/OD280比值一般为2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验。

• 操作简单，全过程可在40分钟内完成。
  
• RNA纯度高，不含DNA和多糖等杂质。
  
• RNA得率高，完整性好。

• 取1mL Buffer Rlysis-F加入1.5mL RNase-free的离心管中备用。
  
• 取50～100mg新鲜真菌或20mg干燥的子实体或菌丝用液氮研磨成粉末，加到上述1.5mL离心管中，立即震荡混匀。
  
  • 液氮研磨过程中要避免样品融化，使用的研钵与药匙等工具应事先用液氮预冷。研磨后的样品应迅速加入裂解液中震荡混匀，避免RNA降解。
    
  • 样品转入离心管时避免带入液态氮，因为液氮在封闭的离心管中迅速转变成气体可能引起离心管的爆裂，请注意安全。
    
  • 如果使用液体培养基培养的真菌样品，可短暂离心弃掉培养基后再用液氮进行研磨。
• 向裂解样品中加入200μL氯仿，充分混匀。12000rpm 4℃离心5min，取上清。
  
• 加入1/3体积无水乙醇，混匀，室温放置3min，12000rpm 4℃离心5min，小心倒掉上清。
  
  • 离心后，在离心管底部，可能无肉眼可见的沉淀产生，属正常现象，请继续以下操作。
• 用700μL的75%乙醇（请用DEPC-treated ddH2O配制）洗涤沉淀，12000rpm 4℃离心3min，小心倒掉上清。
  
• 重复步骤5一次。
  
• 室温倒置10min，尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入50μL的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀，立即使用或-70℃
  长期保存。
  
  • 如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5～10分钟至残留的乙醇完全挥发。
    
  • 吸取残液时注意不要将RNA沉淀取出，避免RNA损失。